抗实体瘤“黑科技”——TIL疗法全球研发全景图
肿瘤治疗方式
手术、放疗和化疗是癌症治疗的三大基石，免疫疗法掀起了癌症治疗的一场革命，这种疗法能持久清除残留在体内的少量的、播散的肿瘤细胞且能提高机体因放、化疗而受损的免疫功能，与常规三大疗法联合应用显示出互补的优势。
经过大量临床实践，免疫治疗在多种肿瘤治疗中展示了其良好的应用前景，可以提高治疗效果，延长病患生存时间，改善肿瘤患者的生活状态，提高生活质量，有望达到长期带瘤生存或彻底治愈肿瘤的目标。
肿瘤的免疫治疗分类
免疫检查点抑制剂（PD-1/L1)
肿瘤疫苗（provenge，cimavax）
过继性免疫细胞治疗（CAR-T）：通过采集人体自身免疫细胞，经过体外培养，使其数量扩增成千倍增多，或增加靶向性杀伤功能，然后再回输到患者体内，从而来杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞。不直接用外力攻击癌细胞，但它通过培养和处理患者体内的免疫细胞来攻击和处理癌细胞，与传统疗法有很大的不同。使用自己的细胞没有明显副作用，它们也可以与三种主要治疗方法相结合，协同治疗，提高癌症患者的生存率。
非特异性免疫调节剂。
过继细胞免疫治疗的分类
正常情况下，我们的免疫系统能够识别和消除已被感染或受损的细胞以及已癌变的细胞。这是因为我们体内被称为杀伤性T细胞的免疫细胞能够识别癌细胞表面成为抗原的标记物。过继性细胞免疫疗法主要利用了这种天然能力，可以通过不同的方式进行治疗。
1）非特异性疗法：没有明确的免疫细胞靶点，是从整体上提高人体免疫力而达到缓解肿瘤症状的非特异性疗法，如NK细胞疗法；
2）特异性疗法：具有明确的靶点和机制，能通过激活或者抑制明确靶点来实现免疫系统对肿瘤的免疫激活，如TCR、CAR疗法。
目前国际上取得重大研究进展的四类过继性细胞疗法：
肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）治疗
工程T细胞受体（TCR）治疗
嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法
自然杀手（NK）细胞疗法
由于癌细胞非常狡猾，会利用一些诸如“喊停”（让免疫细胞无法攻击自己）或“致盲”（让免疫细胞视而不见）的手段，阻止免疫细胞识别、消灭自己——这就是所谓的“免疫逃逸”。
像当前大热的免疫检查点抑制剂（PD-1、PD-L1等），主要针对的就是那些“喊停”手段，通过药物可以让免疫大军挣脱束缚，顺利去攻击癌细胞；CAR-T疗法，则是直接从人体提取一部分免疫细胞，通过基因工程技术，生产出配备有精准定位的“转基因士兵”，让它们能靶向到特定癌细胞，之后对此类士兵大量扩增，并回输到人体中，开始攻击癌细胞。
而TIL疗法则与上述二者皆有不同，属于另辟蹊径（但与CAR-T有类似之处）。
在癌细胞的“喊停”和“致盲”手段下，虽然大多数免疫细胞无法攻击癌细胞，但在免疫大军中，总会有一些智商特别高、战斗力特别强的“兵王”，能够克服癌细胞的种种阴险手段，识别癌细胞的多个靶点，从而杀向肿瘤。
这类细胞便是TIL疗法的核心——肿瘤浸润淋巴细胞。
TIL——是肿瘤间质中的异质性淋巴细胞，包括T细胞及NK细胞等。这些细胞是机体在发现体内的癌细胞后调动免疫大军中深入到肿瘤组织内部，对肿瘤有最强的识别、抵抗和攻击作用的一支“超能敢死队”。到达肿瘤内部后，通过释放细胞毒素直接杀伤肿瘤细胞。此外，TIL还能调节机体免疫功能，提高机体对肿瘤细胞的杀伤能力。
和CAR-T一样，TILs属于过继性免疫治疗的一种，但是这是一种赶超CAR-T的新型实体瘤T细胞疗法。
当1985年Rosenberg教授在利用IL-2 治愈第一个病人后，他迅速意识到IL-2激活了一类免疫细胞。那么第一步就是在“案发现场”寻找武器，自然而然地开始在“肿瘤浸润细胞”中开始了实验。从1986年动物实验证明TIL有效，到1988年发表的第一个TIL临床试验结果，20个入组的melanoma病人中，11个有objective regression! 可以说肿瘤细胞治疗的伟大时代在那一刻开启了。
不幸的是，并非所有患者都有能够识别出肿瘤的T细胞。对于这些患者，医生可以采用一种称为工程T细胞受体（TCR）治疗的方法。
在CAR-T细胞疗法中，在体外经过基因改造的T细胞对一些血源性癌症非常有效，但不能有效区分癌细胞和非癌细胞，因此尽管它们提供了重要的好处，但它们并不适用于所有形式的癌症。在实体瘤患者中，这些T细胞可能导致破坏性的、甚至是致命的副作用。
NK细胞不同于T、B细胞，是一类无需预先致敏就能非特异性杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的淋巴细胞。NK细胞是人体抗击癌细胞和病毒的第一道防线，主要分布在人体的血液、肝、脾、骨髓等部位，它具有细胞毒性效应，能自发杀伤肿瘤细胞和病原体，并参与机体的抗肿瘤免疫监视和免疫应答。
细胞疗法的对比
TILs与CAR-T、TCR-T是基于T细胞的三大疗法，是完全不同于传统细胞疗法的一类新型疗法。其中TILs疗法又是一种赶超CAR-T的新型实体瘤T细胞疗法。
首先，TIL的免疫细胞来自于肿瘤组织，而其他细胞免疫疗法大部分来取自血液。据估计，肿瘤里分离出的免疫细胞，有60%以上能识别肿瘤；而血液里面分离的免疫细胞，不到0.5%——这直接决定了免疫细胞识别肿瘤的能力。
其次，这种新型的疗法不是像传统的简单地扩增回输，而是要确定患者病例中特定的突变。之后利用突变信息找到能够最有效瞄准这些突变的T细胞，最后提取出专门患者肿瘤中细胞突变的T细胞，这些细胞具有精准识别癌细胞的能力。相比之下，CAR-T和TCR-T中用于治疗的T细胞是通过基因转染技术改造的外周血T细胞，是进行修饰而非筛选培养，因此，精准识别的能力与TIL细胞相差甚远。
最后，TILs疗法扩增数量庞大。TILs细胞经过分离筛选后，会加入白细胞介素2进行培养，增加免疫细胞存活的几率，最大限度地扩增免疫细胞，达到数百亿至数千亿级别，确保T细胞的有效性和活性后重新注入到患者体内，这意味着体内的抗癌“兵力”大大增强。
表2. 三大免疫疗法单次注输细胞数量
TIL疗法流程
图1. TIL细胞疗法主要流程
获取患者肿瘤组织
将组织送往专门的实验室，加工组织，分离出肿瘤浸润淋巴细胞
体外培养、增殖、收集等
低温保存制剂，送回治疗机构
患者接受短期化疗
回输TIL
进行免疫调节疗法（如白介素2），刺激TIL活性
TIL疗法优势
TIL疗法能在CAR-T技术成熟的过继性细胞疗法市场继续突破这些肿瘤疾病领域，在于其独特的优势：
与所有的免疫治疗方案一样，TIL疗法的优势在于通过改善免疫环境抑制肿瘤。且TIL疗法与CAR-T疗法作用原理相似，具有使患者达到临床治愈的潜力。
TIL具有更强的肿瘤细胞靶向能力，TIL疗法的主体免疫细胞来源于患者的肿瘤组织，对比其它血液来源的免疫细胞来说对肿瘤细胞的识别能力更强。
不受患者免疫进程影响，从切除肿瘤中分离的TIL在体外扩增至数十亿个细胞，能远离抑制性影响，从而获得有效的、高度活化的细胞。而对于CAR-T细胞来说，通常影响其制备成功的一个关键因素是患者体内T细胞的质量问题，TIL疗法避免了这方面的问题。
TIL疗法成本更低，提高了患者可及性。诸如CAR-T/TCR-T细胞，都需要经过工程化将CAR/TCR转入T细胞中，使其具有特异性靶向肿瘤细胞能力。TIL疗法则省略了这一步，只需要筛选出特定突变的免疫细胞，然后在体外扩增并回输给患者。大大降低了治疗成本，能使更多患者受益。有业内专家预计，TIL疗法的价格约在7-8万美元，目前CAR-T细胞的价格均在数十万美元级别（Yescarta定价为37.3万美元）。
与目前其他的癌症治疗方法相比，TIL治疗相关的副作用是较少的，并且大部分副作用是进行TIL治疗前的化疗引起的。
回输TIL细胞后可能出现的不良反应主要为：短时间发烧、寒颤、气短；其他副作用包括：血小板减少症、贫血、白细胞计数低
TIL疗法劣势
TIL疗法目前也面临一些挑战。
比如：在回输之前，生产人员需要在短时间内将TIL扩增到成千上万倍，这对于工艺的要求是很高。
其次，由于TIL细胞已经天然归巢到肿瘤组织一次，在细胞生命进程上倾向于耗竭，因此，我们在体外扩增过程中要逆转这种耗竭状态，恢复细胞活力，这同样是极其困难的。
研发进展
表3. TIL疗法全球研发进展
目前正在开发 TIL 疗法的两家美国上市公司：
● Iovance Biotherapeutics, Inc.
是首批专注于开发 TIL 作为疗法的生物技术公司之一，成立于 2007 年，并于 2010 年首次公开募股。Iovance 率先向行业、监管机构和肿瘤学家介绍了 TIL 治疗实体瘤的潜力。
Iovance Biotherapeutics的 lifileucel（LN-144）和LN-145进展最快，分别用于不能切除或转移的黑色素瘤；复发或转移的头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）、复发或转移的非小细胞肺癌（NSCLC）以及宫颈癌的II期临床研究。其中LN-145被FDA授予突破性疗法，用于治疗复发性、转移性或持续性宫颈癌以及化疗前后的疾病进展。
过去的 5-6 年里，Iovance已将黑色素瘤、宫颈癌和头颈癌的临床试验推进到 2 期和 3 期。已经在黑色素瘤和宫颈癌两大癌种获得了FDA授予的突破性疗法称号，预计这款疗法将在今年上市。
2020年11月在SITC2020大会上，Iovance公司公布了其TIL细胞疗法管线LN-145联用帕博利珠单抗（PD-1单抗），治疗晚期、复发或转移性头颈癌的临床试验结果，该疗法达到44%的客观缓解率(ORR)与89%的疾病控制率(DCR)。此外，Iovance公司的TIL疗法管线在晚期黑色素瘤（ORR为36%）、宫颈癌（ORR为44%）、Opdivo单抗治疗后进展的晚期NSCLC（ORR为25%）的治疗中也展示出喜人的疗效。
一旦获批，这将成为实体肿瘤首款获批的过继性细胞免疫疗法。业内专家估计这款相当于量身定制的免疫疗法价格也会较高，约在70000~80000美金，对于大部分国内的患者来说遥不可及。
● Instil Bio, Inc.
成立于2018 年，2021 年首次公开募股。它采用制药行业的“快速跟进”模式，建立在Iovance 在TIL 治疗方面的成功基础上。通过收购，Instil Bio 获得了制造知识产权和工艺技术，以及近十年的相关数据。Instil Bio 拥有与 Iovance 类似的临床管道：他们的黑色素瘤临床试验处于第一阶段，其他适应症（非小细胞肺癌、头颈癌、宫颈癌、皮肤癌）被确定为 IND-enabling。
目前国内，TIL公司大约分两种类型：一种是偏向于研发，对肿瘤浸润性T细胞进行基因组水平改造，使最终获得细胞在对肿瘤应答和对抗肿瘤微环境以及淋巴细胞归巢等方面有所改善；另一种偏向于工艺开发，能够大规模扩增活力状态良好的淋巴细胞。
1、北京卡替医疗
是中国TIL/新抗原等创新免疫细胞治疗的代表性企业，参与承担了多项国家级和省部级科研课题。公司研发的“超强型TIL”疗法技术致力于攻克实体肿瘤，在理论上突破了传统CAR-T/TCR-T/TIL疗法的诸多局限，在安全性、疗效、适用人群、制备周期和成本等诸多方面拥有优势。由上海东方医院李进教授等多位知名PI主持的公司产品“超强型TIL”治疗晚期实体瘤的临床试验正在进行中。
卡替医疗自主研发的“超强型TIL”免疫细胞治疗技术是目前处于国际最前沿的TIL和CAR-T等技术基础上的“青出于蓝”的重大升级——其产品借助“增强受体”和“扩增因子”等专利技术，对TIL细胞进行基因改造，全面解决了上述关于实体瘤的异质性、微环境，以及细胞扩增工艺、制备周期和成本的诸多难题。
除此之外，卡替医疗研发的第四代产品——“超强型cTIL”，仅需采集外周血中的TIL细胞，突破了传统TIL疗法依赖于手术组织取材的局限。这一突破使得TIL疗法几乎变得人人可及，极大地拓展了适用人群。
2021年2月宣布完成亿元级Pre-B轮融资，由丰廪资本领投。本次融资将用于支持卡替医疗公司的“超强型TIL”细胞治疗产品完成IND申报，卡替医疗此前曾获得由建银医疗成长基金等投资机构投资的A+轮投资。
2、劲风生物
于 2020 年初由企业家兼科学家于福利博士发起创立，旨在通过将多组学/生物信息学/人工智能与细胞疗法进行无缝整合，发展 TIL 疗法在临床上的应用，治疗治愈实体肿瘤患者，提升患者生命质量。10月份完成千万美元 A 轮融资，由道彤投资领投自成立至今。
劲风生物一直在打磨开发其尖端的 TIL（肿瘤浸润淋巴细胞）治疗平台，目前其 “武器库” 包括新抗原驱动 TIL、单细胞多组学 TIL 扫描，以及端到端 CMC。该司始终坚持自主研发与外部合作双轮驱动，已经与中美众多顶尖的研究机构团队建立了紧密合作。
成立之初，劲风生物就得到了该行业领域的专家认可——美国科学院院士、贝勒医学院遗传系系主任 Brendan Lee 教授是劲风生物的天使投资人兼科学顾问。该司其他知名科学顾问还包括贝勒医学院细胞治疗系（CGT）主任 Helen Heslop 教授、医学专家陆舜教授。
劲风生物创始人&CEO于福利博士于贝勒医学院（师从美国科学院院士、著名基因组学泰斗Richard Gibbs 教授）获得分子遗传学博士学位后，于博士又去往哈佛大学，在哈佛医学院（师从著名群体遗传学家、古人类遗传学家David Reich 教授）完成了博士后的研究工作。
在美国贝勒医学院遗传系人类基因组测序中心就职，参与以及领导多项国际重大人类基因组项目，其中包括人类基因组单体型项目、人类千人基因组项目、人类心血管疾病项目等，其所在实验室获得过NIH数千万美元科研资助。截至目前，于博士已发表国际文章70余篇，被引用45000次，其主导的多款研发软件也被广泛应用。
在创建劲风生物前，于福利博士还曾担任贝瑞基因公司的首席信息官，主要负责整体生物信息分析、产品研发和云计算技术人工智能技术在基因组学的应用。任职期间，于博士成功孵化了贝瑞基因重点项目转化子公司：以肿瘤检测为主的“和瑞基因子公司”，以大数据为主的“福建贝瑞基因大数据产业园”，以消费基因检测为主的“圆基因子公司”等。
3、上海君赛生物科技有限公司
君赛生物于2019年7月成立于上海，是一家新型实体瘤细胞疗法创新企业，致力于开发基于肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的实体瘤创新疗法与“first-in-class/best-in-class”细胞疗法，覆盖多种复发难治性肿瘤。现已建立TIL细胞富集培养和高效安全的非病毒载体T细胞基因修饰等核心技术，目前产品已进入非注册临床研究阶段。
君赛生物于2月完成近亿元A轮，由凯泰资本领投，幂方资本跟投，老股东复容投资持续加注，浩悦资本担任本轮融资的独家财务顾问。
创始人/CEO/CTO“金华君，民建上海市生物医药专委会执行主任。金华君博士具有丰富的高校、医院、企业的跨界从业经历，深耕肿瘤免疫机制研究和细胞疗法开发十多年，积累了大量第一手研发与临床研究经验，熟练掌握细胞新药早期设计、工艺与检测技术开发、临床前研究、临床研究、新药注册申报等全流程。曾开发全球首个自表达抗体的CAR-T细胞治疗实体瘤的临床级技术，以及国内首个基于非病毒载体的CAR-T细胞新药品种，自主建立高效简便的TIL细胞富集培养技术以及转基因TIL细胞治疗方案。主持“重大新药创制”国家科技重大专项项目2项，国家自然科学基金2项，其它省部级课题6项；申请发明专利80项（已授权10项）；发表SCI论文30篇（以第一作者或通讯作者发表20篇）；曾开展30项细胞免疫治疗项目的临床研究。
4、沙砾生物
沙砾生物成立于2019年，专注于针对实体瘤的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）创新产品的研发及临床应用，TIL疗法是当前实体瘤免疫治疗领域最前沿、最具竞争力和产业化潜力的技术方向。公司创始团队来自于高度专业且经验丰富的海归博士，目前已与国内多家顶级医院组成战略合作伙伴。
于2020年12月11日宣布完成1亿人民币的A轮融资，刘雅容博士作为创始人兼CEO。
沙砾生物的核心优势有两点：第一，公司核心团队的科学背景是高度互补的，并且都深耕于肿瘤免疫领域多年，其中70%都具有海外的细胞治疗工业化经验，这是非常稀缺的人才资源；第二，在临床运营方面，在短短一年中，拓展了十多家三甲医院，展开深入的合作，取得了大量的临床样本以支持工艺开发。
5、原启生物
原启生物（原名原能医学）成立于2015年，立足开拓创新，为全球未被满足的临床需求开发效价可及的药物，致力成为全球领先的肿瘤免疫治疗新药的创制者。公司于2019年底获得启明创投近亿元的Pre-A轮独家投资，2020年末完成超过2亿元人民币的A轮融资。
深耕6载，斥巨资构建了4大基于肿瘤免疫治疗药物研发的专利技术平台：Ori®Ab抗体发现技术平台、Ori®CAR高记忆性高活力CAR-T技术平台、Ori®TIL细胞高效扩增稳定可控培养平台、Ori®UCAR通用型便捷性高效性CAR-T技术平台。从靶点筛选、肿瘤免疫微环境、T细胞浸润与杀伤能力等方面着手突破了CAR-T等治疗实体肿瘤的疗效瓶颈，致力于开发疗效好、差异化、成本可及的创新型肿瘤免疫细胞治疗药物，在推动“创新药、中国造”的发展浪潮中不断开立新局。
原启生物Ori®TIL—细胞高效扩增培养技术平台拥有三大技术手段有效解决TILs细胞体外扩增难度大，无特异性肿瘤残留检测方法以及制备成本高昂等瓶颈问题：
提升年轻态TIL细胞增强肿瘤杀伤活性和纯度，增强组织驻留记忆性T细胞（TRM）同时缩短细胞培养周期，保障了临床应用的有效性；
开发了通用新型的检测方法，低于普通检测下限，T细胞成分明确，质量可控，确保回输制剂的安全性；
应用封闭体系生产，从培养基、因子等试剂耗材以及设备、人员、场地等方面降低了平均制备成本，提高了临床治疗成本的可负担性。
目前已经形成了10项自主创新主要靶向实体瘤的细胞药物和双特异性抗体管线，6项肿瘤免疫细胞治疗产品已经进入临床开发阶段。（已有一个抗体药物进入1期，http://www.oritp.com/product/）
国内研发进展
1、中国的研究人员宣布，已成功研发出一种新型的超级TIL疗法。
与美国传统的TILs疗法不同，超级TIL（Super TIL，STIL）是将肿瘤浸润T淋巴细胞（TIL）从患者血液中提取出来后，在体外进行改造，使得这部分TIL细胞获得攻克肿瘤微环境障碍的能力，以及在体内近乎无限复制扩增的能力，这种新型的技术可以同时解决肿瘤识别、克服微环境和高效扩增的三大难题，实现强效抑癌效果。
据全球肿瘤医生网医学部了解，国内的TILs疗法是在美国的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法基础上经过改良，并进一步给予基因修饰，提升其克服肿瘤微环境和增加自我扩增的能力，在前期的概念验证临床研究中已取得了非常积极的疗效和安全性验证，目前已获得批准正式开展人体临床试验招募患者。
2、TIL细胞治疗在国内有相应的成药性和质控标准吗，还是说可以借鉴CAR-T细胞治疗？
从大方向来说，TIL是可以参照CAR-T的质控标准。细胞治疗产品的放行检一般包括安全性指标和效能指标。安全性指标对于所有细胞治疗产品是非常类似的；而在效能指标方面，基于FDA和IOVANCE公司的沟通可以看出，由于TIL是一个复杂的混合细胞群且没有靶标，企业和监管部门均没能找到一个明确的效能指标来预测其最终的疗效。但随着这个疗法的普及和发展，企业和监管部门最终将会找到一个科学的、可执行的效能指标。
*声明：统计时间截止到2021年12月31日，因笔者水平有限，内容如有不足之处，欢迎补充及指正。
参考资料：
[1]https://mp.weixin.qq.com/s/XK8_uTdJ6bQ9HPmmEHRq9A
[2]https://m.chunyuyisheng.com/m/topic/493236/
[3]https://www.iovance.com/clinical/immunotherapy-for-solid-tumors/
[4]http://care.39.net/a/210910/9429588.html
[5]https://www.sohu.com/a/333746755_120060272
[6]https://zhuanlan.zhihu.com/p/359627865
[7]https://www.iyiou.com/news/202102261014869
[8]各公司官网
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